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Les polysaccharides sulfatés présents dans les micro- et macro-algues (i.e. agars, carraghénanes etc.) ou sécrétés par les bactéries marines représentent la biomasse marine la plus abondante. Même s'ils sont moins abondants dans les organismes terrestres, les polysaccharides sulfatés sont impliqués dans de nombreuses voies biologiques importantes (i.e. les glycoaminoglycanes). Les sulfatases sont des enzymes qui catalysent l'hydrolyse des groupes ester sulfate. Ces enzymes sont impliquées dans le remodelage et la dégradation des polysaccharides sulfatés. Malgré le grand nombre de gènes de sulfatase séquencés durant les programmes génomiques et métagénomiques, très peu ont été caractérisées biochimiquement et étudiées au niveau moléculaire par cristallographie.
L’objectif du projet sera d’étudier des sulfatases potentiellement impliquées dans les voies de dégradation des polysaccharides d’origine marine. Environ 200 enzymes sélectionnées par des analyses bioinformatiques, seront produites par surexpression hétérologues. Les enzymes purifiées seront criblées sur une collection de poly- et oligo-saccharides sulfatés. Les modalités de dégradation seront analysées par des approches de chromatographie et de RMN.
Activités
Le ou la candidat(e) aura pour mission 1) de produire de façon hétérologue dans E. coli et un nouveau système d’expression d’origine marine, 2) de purifier les sufatases. 3) Les activités des enzymes solubles seront testées sur une collection de substrats. Des expériences de biologie moléculaires (clonages, sous-clonage, mutation…) seront également mises en œuvre dans le cadre du projet.
Les enzymes les plus intéressantes seront analysées par des approches d’enzymologie moderne (e.g. chromatographie, RMN…). Ces travaux s’inscrivent dans le cadre d’un projet collaboratif (ANR) et le ou la candidat(e) sera amené (e) à présenter ses résultats.
Compétences
Le ou la candidat(e) aura une formation de niveau bac+2/3 de biochimie/biologie moléculaire. L’étude de nombreuses cibles enzymatiques et le travail avec une collection de substrat exige de la rigueur et de l’organisation.
Contexte de travail
Les travaux seront réalisés dans un laboratoire du CNRS : le Centre de Recherche sur les Macromolécules Végétales (CERMAV) spécialisé dans la recherche en glycoscience (https://www.cermav.cnrs.fr/).
Les travaux seront réalisés dans un laboratoire du CNRS : le Centre de Recherche sur les Macromolécules Végétales (CERMAV) spécialisé dans la recherche en glycoscience (https://www.cermav.cnrs.fr/).